Các phương pháp phân lập, nuôi cấy vi khuẩn

Điều quan trọng trong quá trình nuôi cấy vi khuẩn là tránh không đưa thêm vi khuẩn ngoại nhiễm vào môi trường nuôi cấy. Do vậy, ngoài các thao tác luôn phải được tiến hành trong điều kiện vô trùng tuyệt đối, mọi yếu tố từ môi trường, dụng cụ chứa, dụng cụ nuôi cấy đến các vật dụng cần thiết đều phải được khử trùng trước khi sử dụng.

Phương pháp phân lập, nuôi cấy vi khuẩn là gì?

Phân lập là khâu quan trọng trong quy trình điều tra và nghiên cứu nuôi cấy vi khuẩn .

Mục đích của phương pháp phân lập là tách riêng các vi khuẩn từ quần thể ban đầu tạo thành các clon thuần khiết để khảo sát và định loại. Khi vi khuẩn tăng trưởng và phát triển trên bề mặt môi trường rắn đã tạo ra những khuẩn lạc, hình thái của các khuẩn lạc sẽ mang tính đặc trưng của từng loại vi khuẩn. Việc mô tả chính xác các khuẩn lạc đã tách rời có thể góp phần rất quan trọng trong việc chẩn đoán vi khuẩn học. Các nhà nghiên cứu vi khuẩn học đã tiêu chuẩn hoá có ý nghĩa khi miêu tả hình dáng, độ cao và bờ, rìa của khuẩn lạc.

Điều quan trọng cách nuôi vi khuẩn là tránh không đưa thêm vi sinh vật ngoại nhiễm vào thiên nhiên và môi trường nuôi cấy. Do vậy, ngoài những thao tác luôn phải được thực thi trong điều kiện kèm theo vô trùng tuyệt đối, mọi yếu tố từ môi trường tự nhiên, dụng cụ chứa, dụng cụ nuôi cấy đến những đồ vật thiết yếu đều phải được khử trùng trước khi sử dụng .

Điều quan trọng cách nuôi vi khuẩn là tránh không đưa thêm vi sinh vật ngoại nhiễm vào môi trường tự nhiên nuôi cấy

Các dạng mẫu cho nuôi cấy và dụng cụ cấy

Dạng mẫu nuôi cấy

Dạng dịch mẫu chỉ định nuôi cấy vi khuẩn đã được giống hệt, dịch nuôi cấy hoặc môi trường tự nhiên lỏng chứa chủng vi sinh vật cần nghiên cứu và phân tích .
Dạng trên mặt phẳng của thiên nhiên và môi trường rắn chứa thạch ( từ 1,5 – 2 % ) trong ống thạch nghiêng hay trong đĩa petri .
Dạng mẫu nằm sâu trong thiên nhiên và môi trường rắn trong ống nghiệm thạch sâu chứa thạch mềm ( 0,5 – 0,7 % ) .

Dụng cụ cấy

Que cấy thẳng : Que cấy sắt kẽm kim loại có đầu nhọn, dùng để cấy vi khuẩn có tạo khuẩn ty .
Que cấy móc : Đây là que cấy có đầu vuông góc, dùng để cấy vi khuẩn có tạo khuẩn ty .
Que cấy vòng : Là que cấy sắt kẽm kim loại đầu có vòng tròn, dùng cấy chủng từ môi trường tự nhiên rắn hoặc lỏng lên môi trường tự nhiên rắn, lỏng .
Que cấy trang : Là que bằng sắt kẽm kim loại hay thủy tinh, đầu hình tam giác, dùng để giàn trải vi khuẩn trên mặt phẳng thạch rắn .
Ống hút thủy tinh : Dùng để chuyển một lượng vi khuẩn thiết yếu lên mặt phẳng thiên nhiên và môi trường rắn hoặc vào môi trường tự nhiên lỏng .
Đầu tăm bông vô trùng : Dùng để cấy giống từ môi trường tự nhiên lỏng lên mặt phẳng của môi trường tự nhiên rắn .

Các phương pháp phân lập, nuôi cấy vi khuẩn

Có những giải pháp phân lập, nuôi cấy vi khuẩn nào ?

Kỹ thuật cấy ria trên đĩa petri

Dùng que cấy vòng thao tác vô trùng nhúng vào dịch mẫu để có những vi khuẩn muốn phân lập .
Ria những đường trên đĩa petri có chứa môi trường tự nhiên thạch thích hợp. Sau mỗi đường ria liên tục, hãy đốt khử trùng que cấy và làm nguội trước khi thực thi thao tác tiếp theo .
Lật ngược đĩa và ủ ở nhiệt độ, thời hạn thích hợp trong tủ ấm .

Kỹ thuật cấy trang

Dùng pipet chuyển 0,1 ml dịch canh khuẩn lên trên mặt phẳng môi trường tự nhiên thạch trong đĩa petri .
Nhúng đầu thanh gạt vào cồn và hơ qua ngọn lửa để khử trùng. Sau đó, để đầu thanh gạt nguội trong khoảng trống vô trùng của ngọn lửa .
Mở đĩa petri, nhẹ nhàng thanh gạt lên mặt phẳng thạch của đĩa petri. Dùng đầu thanh gạt trải đều dịch vi khuẩn lên trên mặt phẳng thạch. Quá trình triển khai hãy xoay đĩa một vài lần, mỗi lần khoảng chừng nửa chu vi đĩa để tạo điều kiện kèm theo cho thanh gạt trải dịch vi khuẩn đều khắp mặt phẳng môi trường tự nhiên .

Lật ngược đĩa và ủ ở nhiệt độ, thời gian thích hợp trong tủ ổn nhiệt.

Cấy giống từ môi trường lỏng sang ống nghiệm chứa môi trường lỏng

Đốt nóng đỏ đầu que cấy trong ngọn lửa rồi hơ nhẹ phần cán, rồi cầm thẳng đứng que cấy cho que cấy nóng đều .
Tay trái cầm ống nghiệm xoay nhẹ, tay phải cầm que cấy. Dùng ngón út của tay phải để mở nút bông. Sau khi mở nút bông, xoay miệng ống nghiệm qua ngọn lửa .
Đưa que cấy đã khử trùng vào bên trong ống nghiệm và làm nguội que cấy ( áp đầu que cấy vào thành ống cho nguội ). Nhúng que cấy vào thiên nhiên và môi trường lỏng, rút thẳng que cấy ra không để dính vào thành và miệng ống để thu sinh khối. Hơ nóng miệng ống nghiệm và đậy nút bông rồi đặt ống nghiệm vào giá đỡ .
Đầu que nuôi cấy vi khuẩn được giữ ở vùng không khí vô trùng gần ngọn đèn. Dùng tay trái lấy ống nghiệm chứa thiên nhiên và môi trường mới rồi mở nút bông và khử trùng miệng ống nghiệm. Tiếp đó, đưa đầu que cấy vào bên trong thiên nhiên và môi trường .
Nhúng và khuấy nhẹ nhàng que cấy trong dịch môi trường tự nhiên để tách sinh khối ra khỏi đầu que cấy .
Rút thẳng đầu que cấy ra. Khử trùng miệng ống nghiệm và đậy nút bông .
Khử trùng que cấy ngay sau khi cấy xong .

Cấy giống từ môi trường lỏng sang ống thạch nghiêng

Phương pháp này thực thi tương tự như như trên, nhưng có một số ít độc lạ sau :
Cấy giống lên trên mặt phẳng thạch nghiêng bằng cách đặt nhẹ đầu que cấy lên mặt phẳng môi trường tự nhiên ở đáy ống .
Sau đó, cấy theo hình chữ chi từ đáy ống nghiệm lên đến đầu trên mặt thạch nghiêng .

Cấy giống từ môi trường lỏng bằng pipet đầu rời

Pipet đầu rời cho phép thao tác đúng chuẩn với những dung tích nhỏ. Trong thao tác vô trùng, pipet đầu rời rất hữu dụng vì nó được cho phép cấy chuyển thuận tiện dịch vi khuẩn lên mặt phẳng thiên nhiên và môi trường rắn trong đĩa petri để tạo khuẩn lạc rời hoặc vào ống nghiệm hoặc bình chứa môi trường tự nhiên lỏng để nuôi tăng sinh. Trước khi sử dụng, kiểm nghiệm viên cần biết những nhu yếu cơ bản trong cách nuôi vi khuẩn với pipet đầu rời như sau :

Pipet đầu rời cho phép thao tác đúng chuẩn với những dung tích nhỏ
Mỗi pipet đầu rời đều có số lượng giới hạn dung tích thao tác được cho phép nhất định đó là : 0,1 ml, 1 – 20 ml, 20 – 20 ml, 0,2 – 1 ml, 1/5 ml, 1 – 10 ml. Nên chọn pipet đầu rời với số lượng giới hạn dung tích thích hợp cho phạm vi thao tác .
Pipet đầu rời có hai nấc : Nấc 1 tương tự với dung tích được chọn sử dụng khi hút dung dịch ; nấc 2 ( vượt quá nấc 1 ) dùng để bơm dung dịch ra khỏi đầu tip của pipet đầu rời .
Khi sử dụng pipet đầu rời để cấy chuyển dời giống thì cần phải thực thi trong khoảng trống vô trùng của ngọn lửa trong tủ cấy .
Tay phải cầm pipet đầu rời, tay trái mở hộp chứa đầu tip vô trùng. Sau đó, cắm đầu pipet vào đầu tip .
Dùng tay trái giữ ống nghiệm và bình chứa dịch giống vi sinh vật. Dùng ngón út, áp út của tay phải đang giữ pipet để kẹp giữ và mở nút bông, sau đó hơ nóng khử trùng miệng ống nghiệm hoặc bình chứa .
Đưa đầu tip vô trùng vào bên trong dịch giống rồi hút lấy dung tích thiết yếu. Sau đó, rút đầu tip ra khỏi miệng bình chứa, khử trùng miệng bình chứa và đậy bằng nút bông đang được giữ ở ngón út và áp út tay phải .
Đầu tip có chứa vi sinh vật cần được giữ ở vùng không khí vô trùng gần ngọn đèn .

Dùng tay trái lấy ống nghiệm hoặc bình chứa môi trường mới, dùng ngón út và áp út kẹp và mở nút bông, khử trùng miệng bình chứa.

Đưa đầu tip vào bên trong môi trường tự nhiên rồi bơm dịch giống vào thiên nhiên và môi trường. Sau đó, rút đầu tip ra khỏi miệng bình chứa, khử trùng miệng bình và đậy nút bông .
Đầu pipet đầu rời và đầu tip được sản xuất bằng polymer cần phải khử trùng tuyệt đối đầu pipet và đầu tip bằng ngọn lửa .
Để bảo vệ sự tăng trưởng của vi khuẩn, sau khi nuôi cấy vi khuẩn xong phải chăm sóc đến những điều kiện kèm theo môi trường tự nhiên nuôi vi khuẩn như : Nhiệt độ tối ưu cho sự tăng trưởng của mỗi loài vi khuẩn và duy trì không thay đổi nhiệt độ ; nhiệt độ trong quy trình nuôi ủ cần bảo vệ đủ lượng nước ; khí oxy so với vi sinh vật hiếu khí, lớp thiên nhiên và môi trường nuôi cấy có độ dày vừa phải để oxy không khí hoàn toàn có thể thấm vào .

Source: https://suachuatulanh.edu.vn
Category : Sức Khỏe